AGTC利用单纯疱疹病毒提高AAV生产效率

腺相关病毒

通过使用单纯疱疹病毒(HSV)作为其腺相关病毒(AAV)平台的一个帮手,应用遗传技术公司(AGTC)创造了比其他任何方法都更健壮、更纯净、成本更低的aav。

其针对X连锁视网膜色素变性(XLRP)的基因治疗计划就是一个很好的例子。AGTC工艺开发负责人Dave Knop博士说:“通过使用其疱疹病毒辅助载体扩展(HAVE)方法,“我们现在实现了成品规格,证明近90%的完整衣壳和极低的残留,其中许多低于检测水平,导致纯度超过97%。”。“这是另外一个收益率,比我们在第一阶段/第二阶段制造活动中取得的收益率高出10倍以上。”

该公司仍在试验中,可以使用40L生物反应器生产商业规模的AAV。

这是特别值得注意的,因为与制造自动增值服务所带来的挑战。首要的问题是复杂性。AAV载体需要同时引入DNA编码AAV复制和衣壳基因,治疗性基因和一个辅助功能基因。很多时候,一些 - 但不是全部 - 元素被成功引进。

AGTC的HAVE方法利用重组、复制不全的单纯疱疹病毒载体,将rep和cap基因序列以及治疗基因导入悬浮培养的幼仓鼠肾(BHK)细胞。

“我们还用于比克电池无血清培养基,制作过程可扩展的,”克诺普说。

与瞬时转染相比,HAVE方法的效率提高了50倍。

Knop告诉BioSpace:“这种方法比转染更有效率,因为病毒会自然地完成它的使命。”。yabo娱乐vip

优点包括高层次的感染性和产品的成本更低。

诺普说:“我们在最终纯化的病毒中看到了非常好的感染率。”。

理想的比例是一对一,即一个载体感染一个细胞。文献报道的比率是50或100:1。AGTC的比率大约是10:1。

AGTC也经历了“与传统细胞培养中的转染相比,产品成本降低了90倍,”Knop补充道。这是可能的,因为HSV方法允许扩展而不仅仅是扩展。“规模扩张随着更大的市场而崩溃。通过我们的工艺,我们可以扩大到一个更大的一次性搅拌槽生物反应器”,而不是添加许多更小的生物反应器。

这使得更小的占地面积和更严格的过程控制,从而降低污染和处理错误的风险。在规模化过程中,它创造了更大的一致性,同时增加了用于临床试验和最终商业化的生产量。

不过,AGTC并不是从这个系统开始的。

“通常情况下,对于非常早期,非临床工作中,研究人员使用最灵活,容易获得他们能系统,”克诺普说。将所得的载体通常产生完全加载向量的相对低的比例,这使得它们不适于制造材料后期临床试验。

他说:“我们使用转染,直到我们缩小选择范围,然后将工作移植到我们的系统,根据需要进行测试和调整。”。“我们的过程比转染更复杂,因此我们将其用于正式毒理学或生物分布研究的项目中,以供FDA提交临床试验。”

为了确保健壮性,AGTC分离单个细胞,将它们扩展成小细胞库,并对其进行生产力和质量筛选。然后,该公司开发了一个强大的下游流程,以进一步分离。这导致了大约90%的衣壳填充率。持续筛选使公司能够满足其质量和纯度的需要,并将有效填充率提高到95%左右。

这个有制造方法根据克诺普和AGTC总裁兼首席执行官苏洗衣机的一篇文章“提供的材料六成功的新药临床研究(IND)申请没有任何临床持有,并已成功地转移到行业合作伙伴和合同制造组织”。

目前,AGTC正在使用HAVE-to-to-manufacturer材料,XLRP是一种罕见的遗传性疾病,它会导致渐进性视力下降,并导致男孩和年轻男性失明。它是由RPGR基因突变引起的。到目前为止,还没有具体的治疗方法。该药被FDA和EMA授予孤儿身份。这是AGTC为患有罕见和衰弱的眼科、耳科和中枢神经系统(CNS)疾病的患者进行临床试验的几个项目之一。

展望未来,“我们将继续完善系统,并与那些需要帮助的人合作,我们的制造能力可能会有用,”诺普说。“我们对这一过程的每一个要素都进行了积极、持续的研究。几乎每一步都在被重新审视,以找到更多更好的细胞系,改进纯化过程和结果,降低商品成本。”

返回新闻亚博app安装